【研究·分享】草本力量——美白动力学
2017.10.12
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随着“天然”“生态”的普及，中草药越来越受到消费者的亲睐，中草药化妆品或者说是植物提取物化妆品不仅仅在很多时候刺激性更低，最重要是对环境的污染更小，降解快而完全。今天我们就以一篇在《BioMed Research International》中的文章（影响因子2.476），了解红葡萄叶美白动力学方面的知识。
红葡萄叶提取物(RVLE)可广泛应用各种医学学科，文中主要是对其成分中没食子酸、绿原酸、表儿茶素、芸香苷（芦丁）、白藜芦醇的美白动力学研究。
实验方法：将买到的RVLE取2g溶解在98mL的去离子水中，并超声40min。通过仪器HERMLE 2206A以6000rpm离心15min。上层清液通过0.45μm过滤器过滤。
1mg的五味子素溶解于10mL 70%甲醇溶液中并通过0.45μm过滤器过滤，收集滤液作为内部标准液。通过高效液相色谱法，分析180μL RVLE+10μL内部标准液。
HPLC分析
这个是RVLE的高效液相色谱图，RVLE中的活性成分为没食子酸、绿原酸、表儿茶素、芸香苷和白藜芦醇，五种成分对皮肤黑色素沉积的改善作用已有报道和研究。通过液相色谱的图谱分析，以上五种成分的含量分别为1.03，0.2，18.55，6.45和0.48mg/g。
RVLE的抑制能力
图二为RVLE作为抑制剂抑制酪氨酸酶的功效图。
RVLE抑制酪氨酸酶的活性具有剂量浓度的相关性。其线性回归的斜率为12.216、Y轴截距3.0097。RVLE溶液的IC50为3.84mg/mL。用曲酸作为阳性对照见图3。
随着曲酸的增加，其抑制酪氨酸酶的功能增强。曲酸的IC50为0.014mg/mL。抑制酪氨酸酶活性的提取物为Vitis vinifera L.（提取其葡萄干的干茎）。虽然RVLE的效果并没有曲酸更好，但是依然会认为作为一种天然来源，可以安全的用在化妆品的产品中。
酪氨酸酶抑制活性动力学研究
RVLE溶液能够抑制多巴的形成，可以通过分光光度计在475nm出检测出来。用0.1mM左旋多巴作为基底，随着其在酪氨酸酶中含量的增加，酪氨酸酶性能会增强。
图4中，
酪氨酸酶的活性与酪氨酸酶的浓度呈现一个线性关系，随着RVLE的增加其酪氨酸酶的活性降低。这就可以证明RVLE具有抑制酪氨酸酶而达到美白的功效。
RVLE的抑制机理可以通过动力学研究，见图5，RVLE的动力学曲线是Lineweaver-Burk双倒数曲线。L-多巴作为基底，曲线以1/V作为Y轴，-1/Km为斜率，随着RVLE的成分含量增加，Y值增大。
见图5，换句话说，
对于所有case，Vmax=0.36mM，但是Km却是随着随着抑制剂含量增加而增长。
因此我们RVLE对酪氨酸酶的结合是通过影响其对L-多巴的结合。RVLE和L-多巴于酪氨酸酶的结合是在同一个位点。如图5所示，RVLE的抑制效应为竞争性抑制。
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